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>分子生物学实验

特色与简介:

分子生物学是在分子水平上研究生命结构与功能的学科,主要研究细胞各种系统之间的相互作用,包括DNARNA和蛋白质合成之间的相互作用以及这些作用是如何被调节的。分子生物学是带动生命科学的前沿学科,许多重大的理论问题和技术问题都依赖于分子生物学的突破而取得进展。鉴于分子生物学具有极强的实验性,使分子生物学实验技术成为2l世纪高素质生物学人才的必备技能.

本科教学中的分子生物学实验是培养学生具有科研素质和动手能力、创新能力的一个重要环节。为了帮助学生更好地理解分子生物学实验技术基本原理,掌握基本实验技能,培养开展科学研究的能力,编写了这本《分子生物学实验》教材。

《分子生物学实验》是山东大学汪天虹主编由北京大学出版社于2009年出版,该书共10章包涵40个实验,首先对分子生物学实验原理与技术进行了概括性介绍。在此基础上,对分子生物学实验的基本技术与方法,包括对来自动植物、微生物细胞的DNARNA样品的制备、克隆和表达载体的制备、重组质粒的构建、重组DNA导入各种受体细胞、外源基因的表达和重组子的鉴定、用酵母表达系统克隆和表达基因、丝状真菌遗传转化系统的基本操作、各种PCR技术原理与应用、工程菌的培养与目标产物的分离等多方面进行了阐述。每章均在详细介绍相关实验技术基本原理的基础上,将基础性实验内容和部分提高、创新性实验内容的操作过程详细列出,以训练和提升学生和其他相关研究人员的分子生物学实验技能。

作为实验教材可针对本科生课时有限、需紧凑地安排实验的特点,自行选择其中若干实验,串联为一套连贯的,内容包括生物体基因组DNA和质粒DNA的提取和纯化,DNA的酶切、连接和大肠杆菌转化,重组子的筛选和检测,DNA或蛋白质凝胶电泳,PCR技术,杂交技术等在内的一系列分子生物学实验,并在实验内容、方法和技术上进行合理安排,使学生在有限的课时中尽可能多地了解和掌握现代分子生物学基本理论和有关实验的基本原理与方法,培养动手能力和创新能力,具备初步的科研素质。

本教材的特点是:针对初学者的实际情况,对分子生物学实验技术的基本原理和实验的具体方法均有较详细的介绍和描述;在此基础上,尽可能把各种实验技术列出供读者选用,同时对实验过程中可能出现的现象和问题予以合理的解答。针对研究生和欲涉猎一些特殊领域(如酵母和丝状真菌研究领域)分子生物学研究人员的需求,在重点介绍通用的大肠杆菌分子生物学实验技术的基础上,增加了酵母和丝状真菌分子生物学实验技术相关章节的内容,尽可能涵盖一些已经发展成熟的新技术、新方法,以帮助那些准备在这些研究领域开展工作的研究生和其他研究人员尽快地掌握相关实验技能,提高研究素质,能较快地进入和开展相关研究工作。这对从事相关内容科研的研究生和科研人员会有所裨益。
  
《分子生物学实验》可作为高等学校生物学科各专业本科生和研究生的分子生物学实验指导教材,同时对从事相关领域的教学、科研人员来说也是一本有益的参考书。

 

目录

1章分子生物学实验原理与技术概述

2章 染色体DNARNA的制备
实验2.1 细菌染色体DNA的提取
实验2.2 酵母染色体DNA的提取
实验2.3 SDS裂解法提取丝状真菌染色体DNA
实验2.4 RNA的提取
实验25 凝胶电泳进行DNA分离纯化
实验2.6 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定

3章 载体的制备
实验3.1 质粒DNA的提取——碱变性提取法
实验3.2 胧删
NA的提取
实验3.3 NA去磷酸化臂的制备

4章 重组质粒的构建
实验4.1 限制性核酸内切酶的酶切反应
实验4.2 酶切DNA片段的CIP处理
实验4.3 酶切DNA片段的分离与回收
实验4.4 载体与外源DNA的连接反应

5章 重组DNA导入受体细胞
实验5.1 感受态细胞的制备及质粒转化
实验5.2 胧删
逶靥逵胪庠碊NA片段的连接、体外包装与扩增(基因组文库的构建)

6章 重组子的鉴定和外源基因的表达
实验6.1 E.coli转化子的筛选与验证
实验6.2 Southern印迹杂交
实验6.3 Northern印迹杂交
实验6.4 斑点印迹杂交
实验6.5 外源基因的诱导表达
实验6.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白的表达
实验6.7 Western印迹技术检测重组蛋白的表达

7章 在酿酒酵母中克隆表达外源基因
实验7.1 酵母染色体DNA的提取
实验7.2 木糖还原酶基因的获得
实验7.3 重组质粒的构建(酶切连接)
实验7.4 酵母质粒的小量提取与插人方向验证
实验7.5酵母菌LiAc完整转化酵母细胞
实验7.6酿酒酵母转化子的验证
实验7.7重组酵母木糖还原酶活性的测定
实验7.8重组酵母菌株发酵实验及发酵产物分析

8章 丝状真菌的转化与转化子的筛选
实验8.1 瑞氏木霉原生质体的制备与转化实验
实验8.2 瑞氏木霉原生质体电转化实验
实验8.3 农杆菌介导的瑞氏木霉转化
实验8.4 振荡破壁法快速小量提取瑞氏木霉染色体DNA
实验8.5 瑞氏木霉潮霉素抗性转化子的PCR鉴定

9 PCR技术原理与应用
实验9.1 PCR扩增目的片段
实验9.2 一步法RT-PCR
实验9.3 两步法RT-PCR

10章 工程菌的培养与目标产物的分离
实验10.1 重组E.coli诱导表达外源内切B-14-葡聚糖酶
实验10.2 E.coli中提取纯化目的重组蛋白
附录